pAAV-PEG3-sTRAIL质粒的构建及表达研究

目的构建pAAV-PEG3-sTRAIL质粒并检测其诱导细胞凋亡的作用。方法从大鼠尾巴中提取gDNA,PCR扩增PEG3启动子,测序后定向替代pAAV载体中的CAG启动子。从培养的NTERA-2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增sTRAIL基因（编码氨基酸序列114-281）,测序后定向插入至pAAV-PEG3质粒的多克隆位点。用pAAV-PEG3-sTRAIL质粒FUGENE HD转染人hSF、NTERA-2和hES细胞,用半定量RT-PCR和流式细胞仪分别检测sTRAIL基因的表达和细胞的早期凋亡。结果限制性内切酶酶切和测序分析证实,本文成功地获得了PEG3启动子和sTRAIL基因片断,并将PEG3和sTRAIL准确插入了pAAVL质粒。转染hSF、NTERA-2和人胚胎干细胞（hES）后,检测到sTRAIL基因的表达及其引起的肿瘤细胞NTER-A-2的早期凋亡。结论成功构建了pAAV-PEG3-sTRAIL质粒,并有可能用于肿瘤的基因治疗。