含CSFV E2基因A／D区原核表达载体的构建表达及其抗原性研究

应用RT-PCR方法扩增了编码猪瘟病毒石门株(CSFV shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,然后将其克隆到pMD-18T质粒中,获得重组质粒pMD-E2.再以pMD-E2为模板,另行设计两对引物,同时扩增其中一段适于在E.coli中表达且抗原反应性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列),将扩增的两片段串联插入原核表达载体pET-32a中构建成重组质粒pET-2e.用酶切和序列分析鉴定插入目的基因的正确性.SDS-PAGE和Western-blot分析表明,经pET-2e转化、IPTG诱导的受体菌可表达目的蛋白,克隆在硫氧还蛋白(thioredoxin protein,TrxA)基因下游的E2蛋白基因与TrxA基因获得了高效融合表达,并且具有免疫学反应活性,这为猪瘟的血清学诊断方法的建立打下了基础.