利用Cas9 RNP技术制备B2M和PD-1高效率双基因敲除的人原代T淋巴细胞

目的观察Cas9 RNP技术制备B2M和PD-1双基因敲除的人原代T淋巴细胞（以下简称T细胞）的效率。 方法设计单向导RNA（sgRNA）后克隆至载体质粒，经转染HEK293T细胞后筛选出高效率的sgRNA；先后构建B2M及PD-1单基因敲除及同时敲除双基因的T细胞，分别通过Sanger测序、TA克隆及流式细胞术等方法验证编辑效率。 结果成功构建包含sgRNA的载体质粒并经初筛获得高效率的B2M sgRNA1及PD-1 sgRNA1；在T细胞中验证B2M和PD-1单基因敲除效率均高达90%；构建双基因敲除T细胞后经验证基因层面的编辑效率高达90%，B2M及PD-1蛋白的表达下调率分别达86%、89%。 结论利用Cas9 RNP技术可制备B2M和PD-1高效率双基因敲除的T细胞。