乙肝病毒HBsAg-EGFP融合蛋白真核表达载体构建及稳定转染Chang Liver细胞系的建立

目的 构建可表达乙型肝炎病毒（HBV）HBsAg-EGFP融合蛋白的真核表达载体；获得重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系。方法 利用PCR技术从HBV基因组中扩增出HBsAg基因片段，BamH I／EcoR I双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP-N1真核表达载体，转化TG1菌株感受态细胞，获得阳性重组质粒pEGFPN1-HBsAg。将阳性克隆用脂质体法转染Chang Liver细胞，经持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系。结果 成功构建了真核表达载体pEGFPN1-HBsAg；建立了其重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系。结论 重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系可表达HBsAg-EGFP融合蛋白；该细胞系可以用于筛选HBsAg转染细胞后，差异表达的蛋白质研究，为深入研究HBsAg可能的致病机制提供依据。