pcDNA3．1（＋）-mlL-12在Lewis细胞中生物活性的探讨

目的：建立稳定表达小鼠IL-12（mIL-12）的小鼠Lewis肺癌（Lewis lung carcinoma，LLC）细胞系LLC／mIL-12．为进一步研究mIL-12的免疫调节机制及其抗肿瘤作用奠定基础。方法：构建真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-mIL-12，脂质体转染LLC细胞并测其表达。流式细胞仪（FCM）观察细胞周期和凋亡，G418筛选获得阳性克隆后大量培养并检测mIL-12活性。结果：pcDNA3．1（＋）-mIL-12质粒构建正确并成功转导入LLC细胞，重组质粒在mRNA及蛋白质水平均高表达mIL—12，mIL—12使LLC细胞周期重新分布，并促进其凋亡。LLC／mIL-12细胞培养上清能明显引起刀豆蛋白A（ConA）激活的小鼠脾细胞增殖。结论：成功构建pcDNA3．1（＋）-mIL-12真核表达质粒，建立具有mIL—12生物学活性的LLC细胞系。