Cyclooxygenase-2 (COX-2) expression by in vitro produced bovine embryos. Preliminary results

Resumo: Neste estudo foi investigada a expressao das duas isoformas do enzima ciclo-oxigenase, ciclo-oxigenase-1 (COX-1) e ciclo-oxigenase-2 (COX-2), em embrioes bovinos produzidos in vitro. Os oocitos, aspirados de ovarios provenientes do matadouro, foram maturados e fertilizados in vitro e os presumiveis zigotos cultivados em monocamadas de celulas da granulosa com TCM199+10% de soro de vaca superovulada em cio durante 12 dias. Procedeu-se a extraccao e RT-PCR (Reverse transcriptase-Polymerase chain reaction ou Transcritase reversa-Reaccao em cadeia da polimerase) do RNA de embrioes nos estadios de blastocisto expandido (n=30) e eclodido (n=16). Utilizaram-se iniciadores especificos para o COX-1 e COX-2, assim como para a β-actina bovina, que constituiu o controlo positivo. O produto amplificado foi avaliado num Agilent Bioanalyzer. A taxa de embrioes produzidos foi de 33,7 ± 4,0 % e a taxa de embrioes eclodidos de 59,6 ± 6,8%. Estes embrioes no estadio de blastocito eclodido expressavam a COX-2, mas nao a COX-1, enquanto que no estadio de blastocito expandido nao foi identificada a expressao de nenhuma das enzimas. A β-actina foi expressa em ambos os estadios. Os presentes resultados demonstram que os embrioes bovinos produzidos in vitro expressam a COX-2 apontando para a importância da via metabolica do acido araquidonico no desenvolvimento embrionario preimplantatorio. Palavras chave: COX-2, embrioes, in vitro, bovinos Summary: Expression of the two isoforms of cyclooxygenase enzyme, cyclooxygenase-1 (COX-1) and cyclooxygenase-2 (COX-2), by in vitro produced bovine embryos was examined. Cumulus-oocyte complexes were recovered from ovaries of slaughtered animals and subsequently in vitro matured and in vitro fertilized. Presumptive zygotes were cultured in serum containing medium (TCM 199+10% bovine superovulated oestrus serum) on a granulosa cell monolayer for 12 days. RNA from expanded (n=30) and hatched (n=16) blastocysts were extracted and transcribed by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Specific primers either for COX-1 and COX-2 or for positive control bovine s-actin were used. Amplified product was evaluated on an Agilent Bioanalyzer. Embryo production and hatched rates were 33.7±4.0% and 59.6±6.8%, respectively. COX-2 but not COX-1 was expressed in hatched embryos. None of the enzyme isoforms were expressed at the expanded blastocyst stage, while bovine s-actin was expressed at both stages of embryo development. The results presented indicate that COX-2 is expressed by in vitro produced bovine embryos, emphasizing the importance of the arachidonic acid metabolic pathway on the development of preimplantation embryos.