采用 CEL I酶粗提物高效鉴定CRISPR/Cas9介导的基因突变

CRISPR/Cas9是新兴的基因组编辑技术，该技术操作简单、效率高，已成为目前最主流的基因组编辑技术。利用该技术进行突变体创制，对基因功能研究和育种应用具有重要的意义，而快速、高效、低成本的基因编辑个体鉴定是其中的重要环节。本研究对影响 CEL Ⅰ粗提物鉴定CRISPR/Cas9介导的水稻基因编辑个体的条件，包括蛋白用量及作用时间、PCR反应缓冲液等条件进行了探索，并将整个检测体系集成于一管操作。同时，采用 CEL Ⅰ粗提物检测了CRISPR/Cas9介导水稻 stn1 突变的T 0 代植株及后代，对杂合突变、纯合突变及双等位突变的鉴定策略进行了探讨；该方法检测正确率经测序验证达100%。上述结果表明，采用 CEL Ⅰ粗提物检测突变体与已有方法比较具有廉价、快速和高效的特点。