Développement de deux méthodes pour l'analyse de composés organiques volatils, de pesticides et des métabolites associés dans le méconium

Le meconium est une matrice complexe analysee afin de determiner si le degre d'exposition des foetus aux xenobiotiques joue un role dans la survenue de malformations, ceci dans le cadre du projet PHRC " PENEW " (Pregnancy Environment and NEWborn malformations, PHRC 2010, CHU Rennes). Le developpement analytique pour la detection et le dosage dans le meconium de BTEX (benzene, toluene, ethylbenzene, xylenes), de deux solvants trichlores (trichloroethylene et tetrachloroethylene) issus de la famille des COVs (Composes Organiques Volatils), de pesticides (pyrethrinoides, organophosphores...) et des metabolites associes est presente dans ce travail. La preparation d'echantillon est complexe en raison des proprietes physico-chimiques tres particulieres du meconium. Concernant les COVs, la technique par MicroExtraction par Phase Solide (MEPS) en espace de tete couplee a une CG/SM a ete choisie car elle ne necessite pas de preparation prealable de l'echantillon et permet de le preserver pour une autre analyse (utile lors de faibles quantites collectees). L'analyse des metabolites de COVs, des pesticides et des metabolites de pesticides est ainsi realisee sur le meme echantillon par une extraction sur phase solide (SPE). Des cartouches de phases adsorbantes diverses (phase inverse, echange d'anions, echange de cations...) ont ete evaluees. Les conditions de separation des composes cibles ont ete optimisees par le test de cinq colonnes d'interactions differentes (phase inverse, HILIC, mode mixte), par la variation des tampons aqueux pour l'analyse CL/SM/SM (nature et quantite du sel, pH) et par l'optimisation du gradient chromatographique. La colonne Rtx-WAX (30 m × 0.25 mm I.D., epaisseur de film de 0.50 µm) utilisee permet une separation de tous les COVs etudies en particulier les isomeres du xylene. L'optimisation de la methode par MEPS/CG/SM a montre que la fibre CAR/PDMS 85 µm produisait les meilleures sensibilites et que l'ajout de sel n'etait pas necessaire. Les parametres d'extraction ont ete choisis en considerant le meilleur compromis entre la sensibilite spectrometrique et le temps d'analyse. Les essais ont demontre qu'une calibration interne dans le meconium avec des etalons internes specifiques de type isotopique pour chaque compose analyse etait indispensable pour une quantification fiable dans cette matrice. Des limites de quantification (LQ) de l'ordre de 100 pg/g de meconium sont atteintes par cette methode. Pour l'analyse par SPE/CL/SM/SM, les phases presentant les meilleurs rendements sont celles de type phase inverse (C18 polymerique) et echange d'anions forts (SAX). L'utilisation de trois colonnes d'interactions differentes pour la quantification est necessaire pour l'analyse de ces molecules aux proprietes physico-chimiques tres differentes : la RP-Amide (phase inverse) pour l'analyse des molecules apolaires et moyennement polaires ; la HILIC (phase normale) pour les molecules polaires et tres polaires ; et la Trinity P1 (mode mixte) pour le glyphosate. L'optimisation des conditions chromatographiques permet l'utilisation des memes solvants pour ces trois colonnes. Des LQ de l'ordre de 10 ng/g de meconium sont obtenues avec cette methode. Grâce a ces deux methodes analytiques, basees sur l'utilisation du meme echantillon contenant une faible quantite de meconium (1,25 g), il est possible de quantifier la quarantaine de molecules cibles et de mettre ainsi en evidence une exposition du foetus aux contaminants de l'environnement.