MOLEKULEKULÁRNĚ-GENETICKÁ ANALÝZA KONGENITÁLNÍ ADRENÁLNÍ HYPERPLÁSIE (DEFICITU 21-HYDROXYLÁSY)

Kongenitalni adrenalni hyperplasie (CAH) je autosomalně recesivni onemocněni, jehož přicinou ve vice než 90% je defekt enzymu 21-hydroxylazy, kodovane genem CYP21. Výsledkem je nedostatek glukokortikoidniho hormonu kortizolu a mineralokortikoidniho hormonu aldosteronu, zvýseni sekrece adrenokortikotropniho hormonu (ACTH), 17-a-hydroxyprogesteronu (17-OHP) a nadbytek testosteronu. CYP21 gen leži na kratkem ramenku sesteho chromozomu (6p21.3) v okoli genů kodujicich proteiny HLA systemu. V těsne blizkosti CYP21 genu leži jeho vysoce homologni pseudogen (CYP21P). V nasi populaci tvoři asi 60% zjistěných poruch v CYP21 genu bodove mutace. Větsina bodových mutaci pochazi z pseudogenu a jsou výsledkem genove rekombinace mezi CYP21 genem a CYP21P pseudogenem. Přibližně 30% dosud identifikovaných mutantnich alel jsou nefunkcni chimericke CYP21P/CYP21 geny vznikle nerovnoměrným crossing-overem mezi genem a pseudogenem během meiozy. Vzhledem k přitomnosti CYP21P pseudogenu v blizkosti CYP21 genu je DNA diagnostika CAH velmi narocna. Pro DNA diagnostiku CAH jsme zavedli polymerazovou řetězovou reakci (PCR), ktera umožňuje specifickou amplifikaci CYP21 genu. Naslednou sekundarni PCR pak stanovime deset znamých mutaci: p.P30L, c.290-13A/C>G, c.329-336delGAGACTAC, p.I172N, klastr E6 (p.I236N+p.V237E+p.M239K), p.V281L, p.Q318X, p.R356W, c.920-921insT, chimerni CYP21P/CYP21 gen. Metodou PCR se nasledně provede důkaz delece celeho CYP21 genu.V roce 2006 byla do zakladni DNA diagnostiky zavedena metoda MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification). Metoda MLPA slouži k analýze rozsahlých deleci a duplikaci CYP21 genu i celeho přilehleho regionu. Dle zavažnosti onemocněni rozeznavame 3 klinicke formy CAH. Pro mirnou neklasickou formu s pozdnim nastupem (tzv. LO) jsou typicke mutace p.P30L a p.V281L. Mutace c.290-13A/C>G a p.I172N jsou charakteristicke pro pacienty s prostou virilizujici formou (tzv. SV). Ostatni mutace byly nalezeny u pacientů s klasickou formou se solnou poruchou (tzv. SW). Pro spravne stanoveni genotypu probanda je nutne vysetřeni jeho obou rodiců.