UPLC-MS/MS法测定人血浆中25羟基维生素D的浓度及其应用

目的：建立测定人血浆中25羟基维生素D[25（OH）D]的方法,并将其应用于临床。方法：血浆样品经液-液萃取后,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定。以氘代25（OH）D3为内标,色谱柱为Zorbax Eclipse Plus C18,流动相为水（含0.1%甲酸）-甲醇（含0.1%甲酸）,梯度洗脱,流速为0.35 ml/min,柱温30℃采用电喷雾离子源,以多反应离子监测方式进行正离子扫描;用于定量分析的离子对分别为m/z 413.2→395.2[25（OH）D2]、m/z 401.2→383.2[25（OH）D3]、m/z 404.3→368.2（内标）。结果：25（OH）D2与25（OH）D3血药浓度在2-80 ng/ml范围内线性关系均良好（r分别为0.998 0、0.999 9,n=3）,其定量下限均为2 ng/ml,日间、日内RSD为0.78%-9.42%,相对偏差为-2.90%-1.95%。采用该法检测78例健康受试者及98例结核患者体内25（OH）D平均血药浓度分别为（21.53±6.33）、（8.84±4.05）ng/ml,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：该方法准确、可靠、灵敏度高,适用于血浆中25（OH）D的定量分析及人体药动学研究。