重组MAGE-A1／EGFP质粒转染人树突状细胞体外诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫

目的：应用人重组真核表达载体pMAGE-A1／EGFP转染的树突状细胞（Des）在体外诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫。方法：构建重组质粒pMAGE-A1／EGFP，体外电转染该质粒人DCs，通过流式细胞仪检测和胞内染色法LDH法比较转染前后Des在蛋白表达、细胞成熟度和诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫能力的差异。结果：成功构建pMAGE-A1／EGFP真核表达质粒，电穿孔法导入Des后观察到MAGE-A1与EPFG实现等效表达，分别为8．8％±0．9％和8．47％±0．78％。pMAGE-A1／EGFP转染的Des表面CD86、CIMOL和CD83表达水平显著升高，提示Des的成熟度增加；同时表达的MAGE-A1蛋白可与小鼠来源抗MAGE-A1的单抗发生特异性结合，并在体外诱导MAGE-A1特异性CD^＋T细胞克隆扩增，当再次接触MAGE-A1抗原时大量分泌IFN-γ。结论：pMAGE-A1／EGFP转染的Des不仅能在体外诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫，还可通过流式细胞仪进行快速检测，为临床开展MAGE-A1为基础的免疫治疗奠定了一定基础。