P165 Implication de l’interaction entre la NO synthase neuronale et de son inhibiteur protéique endogène PIN dans le contrôle de la sécrétion d’insuline normale et pathologique

Introduction Nous avons precedemment demontre que la NO synthase neuronale (nNOS) controle la secretion d’insuline grâce a des activites metaboliques et non metaboliques. Cette derniere est liee a l’interaction de la nNOS avec son inhibiteur PIN, egalement chaine legere de la myosine V, au niveau des granules d’insuline. Nous souhaitons determiner si l’interaction nNOS-PIN module la secretion d’insuline et est alteree dans des situations d’hypersecretion d’insuline comme chez le rat Zucker fa/fa. Materiels et methodes Le complexe nNOS/PIN/myosine V a ete etudie par co-immunoprecipitation sur la lignee INS-1. L’interaction nNOS-PIN a ete analysee par la methode Spot et par immunofluorescence. La secretion d’insuline a ete mesuree sur les cellules INS-1 et des ilots de rats Zucker fa/fa et fa/+. Resultats Dans la lignee INS-1, nous avons montre une interaction directe entre la nNOS, PIN et la myosine V ainsi qu’une augmentation du complexe ternaire lorsque PIN est surexprime. Apres analyse des regions de la nNOS impliquees dans l’interaction avec PIN, nous avons pu identifier un peptide mutant qui inhibe l’interaction nNOS-PIN avec un Ki de 0,4 μM. Ce peptide (20 μm), conjugue a la sequence TAT du virus HIV, dissocie l’interaction nNOS-PIN de 47 % dans la lignee INS-1 et diminue de 36 % (p  Conclusion Nos resultats demontrent le role du complexe nNOS-PIN dans la modulation de la secretion d’insuline, probablement au niveau de l’exocytose.