低氧诱导因子-1α mRNA在克唑替尼诱导H2228细胞凋亡中的作用

目的探讨低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在克唑替尼诱导EML4-ALK阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡中的作用。方法 （1）用10、30、90、270、810 nmol/L浓度梯度的克唑替尼处理H2228细胞48 h,MTT比色法测定细胞增殖能力。（2）用100、200、300 nmol/L克唑替尼处理H2228细胞48 h,Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞。（3）RT-PCR实验：1采用50、100、200、400、800μmol/L浓度的低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）作用H2228细胞24 h,观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。2常氧对照组（0.5%DMSO培养基48 h）、常氧＋克唑替尼组（0.5%DMSO培养基24 h＋500 nmol/L克唑替尼24 h）、低氧对照组（200μm/L CoCl224 h＋0.5%DMSO培养基24 h）、低氧＋克唑替尼组（200μm/L CoCl224 h＋500 nmol/L克唑替尼24 h）,采用RT-PCR方法检测各组细胞HIF-1α、Akt、VEGF mRNA的表达水平。结果 （1）MTT实验结果示：随着克唑替尼药物浓度升高,H2228细胞增殖抑制率逐渐升高,呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度（IC50）为335 nmol/L。（2）凋亡实验结果示：H2228细胞凋亡率随克唑替尼浓度增加而升高,呈剂量依赖性。（3）RT-PCR实验结果示：1随着CoCl2浓度的增加,HIF-1α的mRNA表达水平逐渐下降,呈剂量及时间依赖性,于200μm/L浓度时下降最明显。2与对照组相比,无论是在常氧还是低氧,克唑替尼组H2228细胞HIF-1α、Akt的mRNA表达均上调,VEGF的表达下调。与常氧＋克唑替尼组比较,低氧＋克唑替尼组HIF-1αmRNA上调更明显（P〈0.05）。结论克唑替尼对肺腺癌细胞株H2228的增殖抑制和诱导凋亡作用呈剂量依赖性,HIF-1αmRNA的上调在克唑替尼诱导肺癌细胞凋亡过程中发挥重要作用。