Pembuatan Antibodi Poliklonal Menggunakan Antigen Protein Rekombinan Sucrose Transporter (SUTl)
2012
Translokasi sukrosa dari jaringan fotosintesis (source) ke jaringan penyimpan (sink) pada
tanaman diperantarai oleh protein sucrose transporter (SUT), sehingga protein ini diketahui
menentukan besarnya akumulasi sukrosa pada tanaman. Deteksi protein SUT pada tanaman
dapat dilakukan dengan menggunakan antibodi spesifik untuk protein tersebut. Penelitian ini
ditujukan untuk pembuatan antibodi poliklonal SUTl menggunakan protein rekombinan
SUTl yang diproduksi dalam sel Escherichia coli. Produksi protein rekombinan SUTl
dilakukan menggunakan fragmen cDNA-SoSUT1 dari tanaman tebu yang disisipkan dalam
plasmid pET28a (Invitrogen). Isolasi protein rekombinan SUTl dilakukan dengan ekstraksi
protein fraksi insoluble dari sel transfonnan E.coli dan purifikasi protein menggunakan kolom
kromatografi afinjtas resin Ni-NTA. Untuk pembuatan antibodi poliklonal sebanyak 0.5 mg
protein rekombinan SU rl murni di campur dengan adjuvant lengkap Freund dan diinjeksikan
secara subkutan dipunggung kelinci New Zealand White. Sedangkan injeksi kedua dan
seterusnya digunakan 0.1 mg antigen per injeksi yang dicampur dengan adjuvant tak lengkap
Freund. Sampel darah dikoleksi sebelum dan setiap minggu setelah injeksi yang keempat,
kemudian dipisahkan serum darahnya untuk pengujian terbentuknya antibodi. Pengujian
terhadap serum darah menggunakan metoda imunodifusi. 0uchterlony menunjukkan
terbentuknya antibodi poliklonal SUTl pada serum darah yang diambil setelah minggu ke enam injeksi antigen. Uji Western Blot menggunakan antibodi poliklonal SUTl dapat
mendeteksi keberadaan protein rekombinan SUTl hingga konsentrasi 1,0 ng. Antibodi
tersebut juga dapat mendeteksi keberadaan protein SUTl pada tanaman tebu dan tomat.
Ketersediaan antibodi poliklonal SUT1 ini akan dapat digunakan untuk mempelajari
keberadaan dan peranan protein SUTl pada proses translokasi serta akumulasi sukrosa pada
tanaman, khususnya tanaman tebu.
- Correction
- Source
- Cite
- Save
- Machine Reading By IdeaReader
0
References
0
Citations
NaN
KQI