水稻纹枯病菌6-磷酸葡萄糖胺合成酶基因的克隆、测序及表达分析

为筛选新型水稻纹枯病菌GlmS活性抑制物质，采用3’RACE和5’RACE克隆了水稻纹枯病菌GImS的基因组DNA序列和完整的cDNA序列。GlmS基因组DNA序列全长2529bp，含有8个内含子；GImScDNA序列全长2094bp，推测编码一个含有697个氨基酸残基。分子量约为76．7kD的蛋白质。生物信息学分析表明水稻纹枯病菌GImS含有1个谷氨酰胺氨基转移酶结构域和2个葡萄糖异构酶结构域。采用大肠杆菌重组融合表达GImS，重组蛋白的分子量经过葡聚糖凝胶层析和SDS—PAGE电泳测得分别为306kD和77kD，表明GImS是由4个相同大小亚基组成的多聚酶复合体。重组蛋白的酶学性质研究表明其最适反应温度为37℃，最适pH为6．4，42℃下的半衰期为1h，在pH5．5～7．5时比较稳定。GImS催化反应能被己糖胺通路末端产物鸟苷氮乙酰葡萄糖胺反馈抑制。