重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓间充质干细胞

目的探讨重组质粒plRESneo-EGFP-BDNF构建及转染至骨髓问充质干细胞（MSCs）制备BDNF基因工程细胞的方法。方法将pEGFP（N1）-BDNF质粒进行改造与pIRESneo相连结，构建携带BDNF的高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF，采用电转染技术转染骨髓MSCs，经G418筛选，通过倒置荧光显微镜判断转染效率，采用Westernblot方式判定转染细胞是否表达BDNF蛋白。结果经过双酶切鉴定，pIRESneo-EGFP-BDNF携带EGFP及BDNF基因，以EGFP为报告基因，质粒构建成功；通过电穿孔技术以及G418筛选，提高plRESneo-EGFP-BDNF转染骨髓MSCs效率。结论成功制备高效表达携带BDNF基因的质粒，且转染骨髓MSCs，为进一步开展BDNF基因治疗神经系统变性疾病奠定基础。