抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

背景与目的：微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体（diabody）载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法：用重叠PCR（overlap PCR）和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12% SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术（FACS）检测生物学活性。结果：基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达。12% SDS-PAGE显示28×103和26×103各有一条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg/L。FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19＋ Raji细胞和CD3＋ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性。结论：本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19＋ Raji细胞和CD3＋ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础。