带有6肽组氨酸的HBV S／S145真核表达载体的构建及应用

目的构建稳定表达带有6肽组氨酸的HBVS／S145蛋白的真核载体。方法应用PCR技术及体外基因重组技术，将S基因和nt587突变的s基因插入带有his—tag的pxF2RH载体中，扩增6个组氨酸和S／S145基因，最后与经Nhe Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切的线性载体pCI—neo连接，构建成带有6肽组氨酸的稳定表达S／S145的真核表达载体（简称pCI—his-SY／S145）。用脂质体转染的方法将质粒转至入宫颈癌细胞，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清中抗原的分泌情况。用western-blot方法检测细胞中外膜蛋白的表达情况。结果真核表达载体pCI-his-SY／S145的测序结果与预期大小一致。ELISA方法可检测到细胞上清中的野生型表面抗原，但检测到145突变抗原表达水平低。应用Western-blot方法可以同时检测到野生型和G145R突变的外膜蛋白表达。结论带有his—tag的重组质粒pCI-his—S／S145可以在Hela细胞中成功表达融合蛋白，且组氨酸可作为检测蛋白的标志。