黄连N-甲基乌药碱-3’-羟化酶基因的克隆及序列分析

目的 克隆黄连Coptis chinensis N-甲基乌药碱-3’-羟化酶[（S）-N—methylcoclaurine-3’-hydroxylase]基因并做序列分析。方法 采用RT—PCR方法，以新鲜的黄连嫩叶eDNA为模板，克隆出黄连N-甲基乌药碱-3’-羟化酶基因的全部序列。结果 克隆到的基因（命名为CYP8083）全长为1680bp，编码一个488个氨基酸残基组成的多肽。其氨基酸序列与日本黄连、唐松草、罂粟和花菱草的N-甲基乌药碱-3’-羟化酶的氨基酸序列同源性分别达95％、82％、70％、68％。将得到的序列提交Genbank，序列号为EF492879。通过与日本黄连的氨基酸序列比对，具有相同功能区域，因而可以参与Ⅳ-甲基乌药碱的3’位羟基化反应。结论 黄连N-甲基乌药碱-3＇-羟化酶基因的成功克隆为黄连植物中原小檗碱型苄基异喹啉类生物碱的基因工程等研究打下了良好的基础。