Etude de l'expression des gènes de sécrétion au cours de la résistance acquise

Outre la resistance systemique acquise induite en reponse a une stimulation microbienne, un phenomene d'acquisition de resistance aux agents pathogenes peut aussi etre observe en reponse a la perception de stimuli endogenes associes au developpement de la plante hote. Par exemple, la nature de l'interaction tabac-Phytophthora parasitica est modulee par le passage de l'etat vegetatif a l'etat floral qui s'accompagne, pour la plante, d'une transition de la sensibilite vers la resistance vis-a-vis de l'agent de la maladie du black shank. Comme dans le cas de la SAR, La stimulation ontogenique aboutit a l'activation de voies de transduction et a l'expression de mecanismes de defense. La resistance affecte a la fois l'efficacite d'infection du champignon et l'elongation des hyphes fongiques. Elle est correlee a l'accumulation apoplastique d'une activite cytotoxique qui declenche in vitro une mort cellulaire des zoospores de P. parasitica. Nous avons developpe un travail d'identification des genes de tabac codant les, proteines secretees ou membranaires et exprimees en relation avec cet etat de resistance. A l'aide de la technologie Signal Sequence Trap, 150 genes differents ont ete caracterises. L'analyse des sequences permet de predire une localisation extracellulaire ou membranaire pour 70% des proteines correspondantes (these Karine Hugot, 2000). Nous poursuivons l'enrichissement de la collection des genes de secretion. Par ailleurs, nous avons entrepris d'analyser l'expression de ces genes dans des situations de sensibilite et de resistance acquise, apres stimulation microbienne ou ontogenique. Les 150 sequences «SST» ont ete immobilisees sur lames de verre pour etre utilisees comme sonde dans des experiences d'hybridation moleculaire. Les puces a ADN ont ete elaborees a l'aide des outils developpes sur la plate-forme genomique de Sophia-Antipolis (UNSA-INRA-CNRS) dans le laboratoire de Rene Feyereisen. Les niveaux d'expression sont determines apres quantification des signaux d'hybridations et compares avec ceux obtenus dans des experiences de northern. Ce travail vise a caracteriser des variations transcriptionnelles associees aux modifications membranaires, parietales ou apoplastiques au cours de la resistance ontogenique et de la SAR. Les perspectives sont, d'une part, de caracteriser les voies de transduction activees et, d'autre part, d'identifier des effecteurs extracellulaires de la resistance acquise qui influent sur des etapes clef de la physiologie des champignons phytopathogenes (germination, elongation, sporulation) et de comprendre leurs mecanismes d'action. (Texte integral)