Caractérisation du gène de vernalisation2 (VRN2) chez le blé hexaploïde (Triticum aestivum L.)

Chez les plantes cerealieres d'hiver, le temps de floraison est retarde jusqu'a ce que les conditions favorables de croissance arrivent. Ce retard est module par les basses temperatures via le processus de vernalisation. Ce processus est regule par au moins deux genes cles, VRN1 et VRN2. Ces genes sont caracterises chez le ble diploide (Triticum monococcum), un ble non cultive. Le gene VRN1 est aussi caracterise chez le ble hexaploide (Triticum aestivum) et il est nomme TaVRT-1(Triticum aestivum Vegetative to Reproductive Phase 1). Un troisieme gene nomme TaVRT-2 est identifie chez le ble hexaploide. L'expression de ce gene durant le processus de la vernalisation est associee a la floraison. Cependant, les interactions entre ces trois genes cles et leur role respectif durant le processus de vernalisation sont peu connus. Pour mieux comprendre leurs relations, nous avons clone les trois copies de VRN2 (TaVRN2) qui correspondent aux trois genomes A, B et D et determine leur patron d'expression durant la vernalisation chez le cultivar de ble d'hiver (cv Norstar) et celui de printemps (cv Manitou). Les resultats montrent que l'expression de TaVRN2 est constitutive chez Manitou alors que son expression est negativement regulee durant le processus de vernalisation chez Norstar. Son expression est aussi regulee par la photoperiode. Certains stress abiotiques comme le choc thermique, la deshydratation, le stress salin, les blessures et l'hormone ABA repriment son expression. L'analyse du promoteur revele la presence d'elements cis impliques dans la regulation de ces stress abiotiques. Les etudes sur la specificite et localisation tissulaire par hybridation in situ montrent que le gene s'accumule dans les jeunes feuilles et au niveau des cellules du meristeme. La sequence codante de la copie B du gene TaVRN2 a ete clonee dans un vecteur pTrcHisB contenant une queue histidine et exprimee dans la bacterie Escherichia coli. La proteine recombinante est verifiee par immuno-buvardage de type western en utilisant un anticorps Anti-His et l'identite de la proteine a ete confirmee par sequencage au spectometre de masse. Les etudes d'interactions proteiques en utilisant le systeme de double hybride chez la levure, revelent que la proteine TaVRN2 interagit avec les proteines TaVRT-1 et TaVRT-2. Des experiences de transrepression du promoteur de TaVRT-1 fusionne avec GFP agissant comme gene rapporteur au niveau des feuilles de tabac et en utilisant la proteine TaVRN2 comme un effecteur ont ete menees. Les resultats indiquent que TaVRN2 seul ne reprime pas l'activite du promoteur Tavrt-1. Cependant le complexe TaVRT-2 et TaVRN2 reprime l'activite du promoteur. La surexpression de TaVRN2 chez Arabidopsis thaliana montre un retard de floraison chez les plantes transgeniques de plus de dix jours,ce qui suggere queTaVRN2 peut agir comme represseur de la floraison chez les dicotyledones.