家蚕miRNA Novel-31＊上调溶血素基因的表达

【目的】Novel-31＊是在家蚕质型多角体病毒（Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,Bm CPV）感染的家蚕中发现的一个差异表达miRNA。本研究旨在验证Novel-31＊对其靶基因表达的调控作用,以便进一步研究miRNA及其靶基因在昆虫免疫调节中的作用。【方法】用生物信息学方法预测Novel-31＊的靶基因,荧光定量PCR分析Novel-31＊及其靶基因在家蚕感染Bm CPV后不同时间点的表达变化;构建miRNA慢病毒表达载体和靶基因慢病毒表达载体,转染293T细胞,同时合成Novel-31＊mimics转染家蚕培养细胞Bm N,使用荧光定量PCR检测Novel-31＊对靶基因表达的调控作用。【结果】生物信息学方法预测发现,溶血素基因是Novel-31＊的靶基因,其结合位点位于溶血素基因的5＇UTR区域。荧光定量PCR分析表明,Novel-31＊及溶血素基因在感染Bm CPV的家蚕血淋巴细胞中呈现明显的上调表达。荧光定量PCR检测表明,在Novel-31＊慢病毒表达载体和溶血素基因5＇UTR慢病毒表达载体转染的293T细胞中和在转染Novel-31＊mimics的家蚕Bm N细胞中,溶血素基因都上调表达。【结论】溶血素基因是miRNA Novel-31＊的靶基因,Novel-31＊与溶血素基因5＇UTR结合,上调溶血素基因的表达。