人抗HER2单链抗体／精氨酸九聚体融合蛋白的基因构建、表达及鉴定

目的：构建人源性抗HER2单链抗体（scFv）／精氨酸九聚体（9R）融合蛋白基因，在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性。方法：采用PCR的方法，扩增融合基因scFv-9R，将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30，在大肠杆菌M15中表达，表达产物经SDS—PAGE和Westernblot鉴定，通过Ni—NTA螯合层析纯化，透析复性，超滤浓缩。ELISA分析scFv-9R融合蛋白抗原亲和活性，凝胶迁移实验检测scFv-9R融合蛋白与siRNA结合活性。结果：成功构建了人源性抗HER2scFv-9R融合基因，经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达。表达的目的蛋白scFv-9R能与HER2抗原结合，同时具有siRNA结合能力。结论：scFv-9R具有结合抗原与siRNA双重活性，为靶向递送siRNA的研究奠定了基础。