GST-His-Heparinase I双标签融合蛋白的原核表达与纯化

以pETl5b-Hep I为模板，通过PCR技术扩增出上游合有6×His标签的HepI基因序列，克隆至表达载体pGEX-4T-1。测序鉴定后，将重组表达质粒pGEX．His．HepI转入E．coliBL21（DE3）感受态细菌，经IPTG诱导表达。表达产物可溶部分用GSTrapFF和HisTrapHP柱两步亲和纯化，所得产物经SDS—PAGE检测，在66kDa和43kDa处显示特异条带，分别与GST．His．HepI和His-HepI融合蛋白预期分子量相符；最终His—HepI融合蛋白的比酶活为86．45IU／mg，纯度高达99％，与仅一步亲和纯化得到的GST．His—Hep I融合蛋白相比，进一步提高了纯化后重组肝素酶的纯度。本研究为制备高纯度的HepI提供了一种方法，对制备高安全性的LMWH和解析HepI晶体结构具有重要意义。