Poly（A）加尾-RNase H消化-RT-PCR法分析应激诱导生成5＇端tRNA半分子

目的建立一种简便、快速检测应激诱导细胞生成的5＇端转移RNA（tRNA）半分子的方法。方法提取应激诱导细胞RNA,用poly（A）加尾酶在RNA分子3＇端加尾后,加入与待测tRNA的3＇端部分序列互补的简并DNA探针杂交,经RNase H消化与DNA探针互补的tRNA序列,再由oligo（dT）n锚定引物进行逆转录获得互补DNA（cDNA）,以5＇端tRNA半分子和锚定引物的序列为PCR反应的上下游引物,PCR扩增检测5＇端tRNA半分子。结果经poly（A）加尾-RNase H消化-RT-PCR-电泳等步骤,可以实现对5＇端tRNA半分子的检测分析。结论 poly（A）加尾-RNaseH消化-RT-PCR法的建立实现了5＇端tRNA半分子的简便、快速检测分析,为tRNA半分子生物学功能研究和检测分析提供了工具。