靶向人喉癌 HEP2细胞 Trop2基因的siRNA 构建及鉴定

目的：构建能高效干扰 Trop2基因的 siRNA，转染人喉癌 HEP2细胞，并初步鉴定其干扰效果。方法以人Trop2基因为靶基因，设计合成3条针对不同作用位点的 siRNA 干扰序列，用脂质体法将各小干扰序列瞬时转染人喉癌 HEP2细胞，同时设立阴性对照、空白对照，分别命名为 W 组（未转染组）、NC 组（阴性对照组）、T1组（S1序列组）、T2组（S2序列组）及 T3组（S3序列组），每组各5例。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达，计算转染效率。转染24 h 后，收集稳定后细胞，采用实时荧光定量 PCR 法检测各干扰序列对 Trop2基因表达的抑制效果。结果荧光显微镜下观察，见 HEP2细胞表达绿色荧光蛋白，证实 siRNA 已转入细胞，转染率达90％。RT-PCR 法结果显示，与未转染组、阴性对照组相比，转染 siRNA 的人喉癌 HEP2细胞中 Trop2表达均受到抑制，与 T2、T3组相比，T1组对 Trop2 mRNA 的抑制作用最明显，差异有统计学意义（0．470±0．063 vs 0．749±0．024，0．824±0．027，P ＜0．05）。结论成功构建并筛选出了能高效、特异沉默人喉癌 HEP2细胞 Trop2基因的 siRNA 序列，为进一步研究 Trop2基因在喉癌中的作用机制及其基因治疗奠定了基础。