Determinación de la mutación K76T de PFCRT en individuos con malaria en una zona de transmisión moderada del Caribe Colombiano

Introduccion: La resistencia de Plasmodium falciparum a los antimalaricos, esta rela­­cionada con mutaciones puntuales en proteinas esenciales en la biologia del parasito. La mutacion K76T en la proteina transportadora resistente a Cloroquina (CRT) es un marcador molecular de resistencia a este farmaco. En Colombia se ha reportado una frecuencia del 100% a esta mutacion. Objetivo: Determinar la frecuencia de la mutacion K76T de CRT en Plasmodium falciparum, infectando sangre de individuos con malaria adquirida en una zona del Caribe Colombiano con transmision moderada. Materiales y metodos: El ADN del parasito se extrajo de laminas diagnosticas usando Chelex-100. Un fragmento de 148 pb de Pfcrt se amplifico por PCR , la mutacion K76T fue determinada por analisis de Polimorfismos en Longitud de Fragmentos de Restriccion ( RFLP ) usando la endonucleasa Apo I, los productos fueron separados por electroforesis en geles de poliacrilamida ( PAGE ). Resultados: Se estudiaron 66 muestras de individuos con malaria adquirida en seis muni­­cipios del Magdalena. Se logro amplificacion de Pfcrt en 56 y la mutacion T76 fue detectada en 55 (98,2%). La presencia de una muestra con el alelo K76 silvestre indicaria la existencia de reversion de la mutacion K76T en Colombia, este fenomeno se ha observado en algunos paises del continente africano, donde se reporto recuperacion de la sensibilidad a Cloroquina. Conclusion: Este estudio es un primer acercamiento hacia el conocimiento de la resistencia a los antimalaricos en zonas de transmision moderada en Colombia Palabras clave: Infeccion malarica, cloroquina, resistencia farmacologica, PFCRT. Abstract Introduction: The antimalarial drugs resistance from Plasmodium falciparum is related to point mutations in the essential proteins to the parasite biology. The K76T mutation in the Plasmodium falciparum Chloroquine resistance transporter (PFCRT) is a molecular marker resistance to Chloroquine. In Colombia the frequency of this mutation is 100%. Objective: To determine the frequency of K76T mutation in the Plasmodium falciparum CRT, infecting blood from people with malaria in the Colombia Caribbean zone with mod­­erate transmission. Materials and methods: The DNA of the parasite was extracted from diagnostic slide using Chelex-100. A fragment of 148 pb of Pfcrt was amplified by PCR, the K76T muta­­tion was evaluated by Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) using endo­­nuclease Apo I, the products were separated by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Results: Sixty six samples from people with malaria of six municipalities of Magdalena were studied. Fifty six DNA samples amplified of Pfcrt gene, T76 mutation was detected in 55 (98.2%). Occurrence of one sample carried the wild allele K76 would indicated the re­­version of K76T mutation in Colombia, this phenomenon has been observed in some coun­­tries of the African continent, where recovery of sensitivity to Chloroquine was reported. Conclusions: This study is the first approach towards the knowledge of the antimalarials resistance in zones with moderate transmission in Colombia. Key words: Malaria infection, chloroquine, pharmacological resistance, PFCRT.