E.coli BL21（DE3）/pET28a（＋）-cr羰基还原酶分离纯化及酶学性质研究

利用强酸型阳离子交换层析和疏水作用层析技术,从实验室构建的羰基还原酶工程菌E.coli BL21（DE3）/p ET28a（＋）-cr细胞中分离得到电泳纯NADP（H）依赖型的羰基还原酶,LC-MS-QTOF分析揭示其相对分子质量为35.4 k Da。该酶能不对称还原6-氰基-（5R）-羟基-3-羰基己酸叔丁酯（CHOHB）、4-氯乙酰乙酸乙酯（COBE）合成阿托伐他汀关键手性合成子6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯、（S）-4-氯-3-羟基丁酸乙酯,对丙酮酸乙酯、丁二酮也表现出较高的还原能力。该羰基还原酶的最适作用条件为：30℃,p H7.5;且活性不依赖于金属离子。它催化CHOHB还原反应的最大反应速度vmax 54.3μmol·mg^-1·min^-1,KmCHOHB值4.4 mmol·L^-1;作用于COBE时,最大反应速度vmax 36.5μmol·mg^-1·min^-1,KmCOBE值1.2×10^-1 mmol·L^-1。E.coli BL21（DE3）/p ET28a（＋）-cr羰基还原酶在他汀手性侧链制造上具有广阔的应用前景。