基于电喷雾电离质谱(ESI-MS)的丙酮稳定同位素标记对 N -糖链的相对定量分析方法的研究

建立了一种基于电喷雾电离质谱的丙酮稳定同位素标记对N-糖链进行相对定量的研究方法．与传统的PNGaseF酶水解N-糖链的方法不同，采用非特异性蛋白酶PronaseE对N-糖蛋白进行处理，使N-糖蛋白被酶解为带有一个氨基酸的糖氨酸（Glycan-Asn），为N-糖链引入了一个氨基活性基团，然后用丙酮对氨基进行标记．用d0/d6丙酮对Ribo B标准糖蛋白的Pronase E酶解产物进行标记，考察了4对d0/d6丙酮标记的Glycan—Asn（Man5～Man8-Asn）在电喷雾电离质谱中的线性、动态范围以及重现性．结果表明，在10倍动态范围内，相对定量方法有良好的线性关系（R=0．9981）和重现性（Cv〈8．7%）．并将建立的方法应用于不同含量的鸡卵清白蛋白中，进一步验证了该方法的可行性．研究结果表明，该方法能准确分析样品中N-糖链的含量，对不同样品中N-糖链进行相对定量．该方法成本低廉，后处理方法简单方便，适于微量样品通量化分析，对差异糖组的研究有一定的意义。