巨桉 miR 156 CRISPR/Cas9载体构建

通过CRISPR/Cas9系统构建 miR 156家族中3个基因编辑载体( miR 156 A 、 miR 156 B 和 miR 156 C ), 为研究巨桉 miR 156家族基因的功能提供借鉴与参考。经聚合酶链式反应(PCR)扩增含靶基因的 miR 156 A-gRNA 、 miR 156 B-gRNA 和 miR 156 C-gRNA , 用BsaI酶切得到线性化的pHDE/Cas9载体后, 经重组酶连接得到重组质粒。将重组质粒转化到DH5α感受态细胞, 再对重组质粒进行PCR鉴定与测序比对分析。结果表明, 利用同源重组的方法构建了带有筛选标记基因 mcherry 的巨桉 miR 156家族CRISPR/Cas9载体系统, 插入序列无突变, 与预期序列高度一致, 重组子阳性率为100%。