甘薯病毒多重 RT-PCR检测方法的建立

为了快速进行甘薯病毒田间检测和脱毒苗诊断，该研究建立了一个能够同时检测 SPCSV 、 SPLV  和  SPFMV  这 3  种病毒的多重 RT-PCR  检测方法。根据 GenBank  公示的甘薯病毒基因序列来设计 3  种甘薯病毒的引物，分别对模板浓度、退火温度、 Mg 2 + 浓度和循环次数进行优化，同时对模板浓度进行 10  倍梯度稀释，检测多重 RT-PCR  灵敏度。结果显示，模板浓度为 19 ng /μ L 、退火温度为 52 ℃ 、 Mg 2 + 浓度为 0 mmol / L 、循环次数为 40 次时，可以同时扩增出大小为 276 bp 、 570 bp 、 425 bp 三种病毒的基因片段，多重 RT-PCR  检测灵敏度为 10 - 4 ，单一 RT-PCR  检测灵敏度为 10 - 3 ，多重 RT-PCR  检测灵敏度是单一 RT-PCR  的 10  倍。该研究使用优化的多重 RT-PCR  检测技术可获得稳定、灵敏、准确、高效地和同时地检测田间复合侵染的 3  种甘薯病毒。