A SUCLA2 mutációk szerepe a mitokondrium foszforilációs rendszerének betegségeiben = The Role of SUCLA2 Mutations in the Disorders of the Mitochondrial Phosphorylation System

Ami a SUCLA2 knock-out egerek hasznalatat illeti, az allatok letrehozasa meg mindig folyamatban van, annak ellenere, hogy a kifizetes teljes egeszeben megtortent. Amint megerkeznek az allatok, munkacsoportunk elsődleges feladata a tervben szereplő, eddig el nem vegzett kiserletek vegrehajtasa lesz. Mindemellett jelentős előrehaladas tortent ket masik transzgenikus kolonia (DLD +/- es DLST +/-) tekinteteben, mint azt a reszletes jelentesben is leirtuk. A COS-7 es HEK293 sejteken tervezett siRNS-sel tortenő SUCLA2 elcsendesitest illetően eddig 4 kulonboző szekvenciat probaltunk ki, de nem tapasztaltunk veluk elcsendesedest. A citoszolikus/nuklearis ATP merest illetően egy Japan kutatocsoport 11 plazmidot allitott elő, melyekről kimutattak, hogy alkalmasak citoszolikus, nuklearis es mitokondrialis ATP meresere FRET alapu indikatorokkent. A plazmidok nemregiben erkeztek meg, jelenleg a mennyiseg novelesen dolgozunk. A (iii) celkitűzest illetően, mely szerint SUCLA2 mutacioban szenvedő betegek fibroblasztjain kiserletezunk: ezeket telomeraz gen altali immortalizalas nelkul felhasznaltuk. Ahogyan azt az előzetes eredmenyek alapjan is josoltuk, azt talaltuk, hogy SUCLA2 mutacioban szenvedő betegekből szarmazo fibroblasztok mitokondriumai gatolt legzesi lanc mellett depolarizaciot mutatnak bongkreksav hatasara, ami az ANT korai megfordulasara utal. | Regarding the aim using SUCLA2 knock out mice, this transgenic animal is still on the process of being generated, even though it has been paid in full. As soon as the mice will arrive in our facility, it will be a top priority to perform all remaining proposed experiments. However, significant progress on two other transgenic mouse colonies, DLD+/- and DLST+/-, as mentioned in the detailed progress report. Regarding siRNA against SUCLA2 in COS-7 and HEK293 cells, we have tried 4 different sequences; however, we have not observed any silencing. Regarding measurements of cytosolic/nuclear ATP, 11 plasmids have been generated by a Japanese group, shown to report cytosolic, nuclear, or mitochondrial ATP levels, operating as FRET-based indicators we have just obtained the plasmids, and we are currently expanding them in quantities. Regarding aim (iii), using fibroblasts from patients suffering from SUCLA2 mutations, we used them as such without immortalizing them by inserting a telomerase gene. Our findings showed that -as predicted by the preliminary results- fibroblasts obtained from patients suffering from SUCLA2 mutations exhibited bongkrekic acid-induced depolarizations in respiration-impaired in situ mitochondria, implying premature ANT reversals.