粉尘螨变应原第1组分原核表达质粒pCold-TF-Der f 1构建及鉴定

目的建立粉尘螨变应原第1组分全长基因原核表达质粒pColdTFDer f 1。方法以质粒pET-28a（＋）Der f 1为模板扩增目的基因Der f 1,克隆至pColdTF DNA载体,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达并用SDSPAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）和蛋白印迹法（Western blotting,WB）验证产物。结果 PCR扩增获得Der f 1编码全长基因,成功构建表达质粒pColdTFDer f 1,SDSPAGE和WB验证表明该质粒在大肠埃希菌中正常表达,且基本为可溶性表达。结论成功建立尘螨变应原原核表达质粒pColdTFDer f 1,并成功实现其原核表达,为进一步生产基因工程变应原提供基础依据。