Caractérisation des cellules tumorales circulantes de sarcomes osseux : identification de nouveaux marqueurs de la pathologie récidivante

Introduction La recherche autour des cellules tumorales circulantes (CTCs) dans les carcinomes est en plein essor. Les enjeux de ces CTCs sont multiples tant sur le plan pronostique que therapeutique avec le developpement de nouvelles therapies ciblees. La caracterisation moleculaire des CTCs a egalement pour objectif une meilleure comprehension du processus de dissemination metastatique. L’osteosarcome est la tumeur osseuse primitive maligne la plus frequente chez l’enfant et l’adolescent et son pronostic reste sombre dans leur forme metastatique. Il n’existe actuellement aucun marqueur membranaire specifique des CTCs des osteosarcomes. Ce travail a pour objectif d’isoler et de caracteriser les CTCs d’osteosarcomes afin d’identifier de nouveaux biomarqueurs de la pathologie recidivante. Materiel et methodes Un modele xenogenique d’osteosarcome murin a ete utilise dans cette etude et ce modele consiste a inoculer en site paratibial des cellules humaines d’osteosarcomes sur-exprimant la GFP. La premiere methode d’isolement des CTCs etait un tri cellulaire par cytometrie en flux. La seconde etait une methode innovante, le DEPArray, une plateforme de tri et d’evenement cellulaires rares. Des experimentations in vivo ont ete realisees pour decrire et valider le modele pre-clinique et etudier l’impact de l’ifosfamide, agent de chimiotherapie de reference dans l’osteosarcome, sur le nombre de CTCs. Une caracterisation in vitro des CTCs isolees a repose sur une analyse de la proliferation, de la migration, de l’invasion, de la sensibilite aux drogues et une comparaison des profils d’expression genique. Resultats L’extravasation des CTCs dans notre modele est un processus precoce intervenant des le 10 e jour avec un nombre moyen de CTCs par souris de 9 apres un isolement par le systeme DEPArray au 10ieme jour et de 56,2 apres un isolement issu d’un tri cellulaire par cytometrie en flux. L’ifosfamide n’a montre aucune efficacite sur le nombre de CTCs quelles que soient les modalites de traitement mais un effet sur le volume tumoral moyen a ete observe. Plusieurs lignees de CTCs ont ete isolees et leur caracterisation moleculaire in vitro a montre une heterogeneite de leur capacite de proliferation, de migration et d’invasion et une variabilite de sensibilite aux traitements.