miR-194慢病毒表达质粒的构建及对人骨肉瘤细胞系U2-OS转移的相关研究

目的：通过构建携带针对miR-194的慢病毒沉默及过表达载体，研究miR-194对骨肉瘤细胞转移的影响。方法：以miR-194前体及成熟体序列为模板，设计引物，进行PCR扩增，酶切后克隆于慢病毒载体plent-i GFP中，转染293T细胞，包装慢病毒颗粒，检测滴度，最终对人骨肉瘤细胞系U2-OS进行感染。获取稳定感染细胞后，进行Transwell、划痕等实验。结果：1）慢病毒表达质粒构建成功，沉默表达及过表达重组慢病毒的滴度分别为4×10^8TU/mL及1.5×10^8TU/mL；2）稳定过表达miR-194的人骨肉瘤细胞系U2-OS的转移能力较其他组有明显降低（P〈0.01）。结论：成功构建了miR-194慢病毒表达载体，miR-194的表达水平对U2-OS细胞的转移能力具有显著影响，miR-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点。