Sulfolobus acidocaldarius DNA聚合酶IV跨越损伤合成能力的酶学特征

目的以嗜酸嗜热硫化叶菌 Sulfolobus acidocaldarius 的DNA聚合酶Ⅳ（Saci_0554）为例，表征其跨越模板上损伤碱基的DNA合成效果。 方法将DNA聚合酶Ⅳ（SacpolⅣ）在大肠杆菌中进行重组表达，经亲和层析纯化得到SacpolIV蛋白；利用人工合成的带有不同损伤的寡核苷酸片段作为模板DNA，用尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，鉴定SacpolIV在体外跨越各种损伤碱基进行跨损伤合成的催化能力。 结果SacpolIV重组蛋白能够不同程度地跨越嘌呤和嘧啶损伤，跨越能力的高低取决于损伤碱基与正常碱基形成氢键的能力。本研究还发现，SacpolIV能够在DNA链中掺入核糖核苷酸，但掺入核糖核苷酸的效率低于脱氧核糖核苷酸。 结论本研究证实SacpolIV具有很强的跨越损伤合成能力，能够跨越多种氢键配对能力减弱的损伤碱基，为其在细胞内的跨越损伤合成功能提供了生化证据。