Impact de la cryoconservation sur l'intégrité structurale et le développement du tissu testiculaire de souris prépubères

La fertilite de garcons prepuberes soumis a un traitement fortement gonadotoxique pourrait etre preservee en ayant recours a une biopsie de tissu testiculaire en vue d'une transplantation autologue apres guerison. Une telle strategie n'est toutefois envisageable que si l'on dispose d'un protocole de cryoconservation permettant de preserver de facon satisfaisante l'integrite structurale et fonctionnelle des tissus preleves. Nous avons developpe un modele murin de congelation de tissu testiculaire immature. Nos travaux ont permis de demontrer que l'evaluation de l'integrite structurale du tissu testiculaire et de la survie des cellules germinales apres decongelation permettaient d'identifier rapidement les conditions de congelation les plus favorables. Differents parametres tels que la nature du cryoprotecteur utilise, sa concentration, le temps et la temperature d'equilibration du tissu avec le milieu de congelation ou le type de descente en temperature ont ete evalues. Une preservation optimale du tissu a ete obtenue en utilisant du DMS01,5M, un temps d'equilibration de 15 minutes et une descente en temperature controlee lente sans seeding. Ce protocole a ensuite ete valide par une evaluation de l'integrite fonctionnelle du tissu cryoconserve apres 9 jours de culture organotypique, ou 4 a 5 mois de maturation in vivo sur le dos de souris ayant recu une allogreffe. Apres maturation in vitro, la proliferation cellulaire, la croissance des tubes seminiferes, l'activite hormonale des cellules de Leydig et la differenciation de cellules germinales etaient comparables a celles du tissu frais. Pour ce qui est des tissus greffes, des taux de differenciation des cellules germinales comparables a ceux observes pour le tissu non congele ont ete obtenus. Des spermatozoides ont ainsi pu etre produits apres allogreffe de tissu immature cryonconserve. Les conditions optimales definies chez la souris ont ensuite ete utilisees afin de preserver des fragments de tissu testiculaire provenant de patients suivis au sein de notre equipe. Une analyse histologique des prelevements a ete effectuee avant et apres cryoconservation. La maladie et ou les traitements anterieurs semblent avoir un effet deletere plus marque sur les tissus provenant des patients les plus âges (entre 11 et 16 ans). Pour ces patients, une absence totale de differenciation des cellules germinales s'accompagne egalement d'une diminution de leur nombre, associee dans certains cas a un ralentissement de la croissance des tubes et a une fibrose peritubulaire et de l'espace interstitiel. La cryoconservation entraine une faible augmentation des alterations morphologiques affectant les tubes seminiferes. Plus de 75% d'entre eux demeurent intacts, meme si l'on observe une diminution moyenne de leur taille de l'ordre de 11%. La maladie, les traitements et la cryoconservation peuvent ainsi etre a l'origine d'alterations structurales du tissu testiculaire humain immature. Il conviendra, lorsque des cellules germinales sont presentes, d'en mesurer l'impact sur son integrite fonctionnelle apres maturation in vitro ou xenogreffe avant d'envisager une utilisation dans le cadre d'une application clinique. De nouveaux parametres de congelation devront etre evalues, chez l'animal, afin d'optimiser le protocole existant.