PCV2 PPV PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及初步应用

参照GenBank中的猪圆环病毒2型（PCV2）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因序列，设计了4对引物分别用于扩增PCV2ORF2、PPVNS1、PRVgB、PRRSVN基因的目的片段。通过对反应因素进行优化，建立了检测PCV2、PPV、PRV、PRRSV的多重PCR（mPCR）诊断方法。敏感性和特异性结果显示，该mPCR对4种病毒的最低核酸检测量分别为29．0Pg（PCV2）、17。3pg（PPV）、36．8pg（PRRSV）、38。4Pg（PRV），而对猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒1型、牛病毒性腹泻黏膜病病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。119份临床样品的多重PCR检测结果显示，有3份样品同时感染PPV和PCV2，68份样品同时感染PRRSV和PCV2，其余样品均为PCV2阳性。表明，建立的多重PCR方法能够对PCV2、PPV、PRV、PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。