Characterization of the penicillin G acylase from Bacillus megaterium ATCC 14945

O objetivo deste trabalho foi caracterizar a enzima penicilina G acilase (PGA) produzida por Bacillus megaterium, uma importante enzima industrial que catalisa a hidrolise de penicilina G, para producao de antibioticos semi-sinteticos. Purificacao da enzima por ultra/diafiltracao nao permitiu detectar a banda de PGA por eletroforese SDS-PAGE devido ao elevado conteudo de outras proteinas remanescentes. Contudo, utilizando DNA do microrganismo que vem sendo estudado, foi possivel amplificar os genes das duas sub-unidades de PGA previstas na literatura, mostrando que a enzima em estudo e tambem constituida de duas sub-unidades, 245 e 537 aminoacidos cada, com massas moleculares medias de 26950 e 59070 Da, respectivamente. Foram estudadas as influencias da temperatura 25-600C, pH 5-10, e concentracao do substrato na velocidade da reacao de hidrolise da penicilina G. A temperatura e pH otimos foram de 370C e 8,0, respectivamente. O modelo de Michaelis-Menten representou bem a cinetica da reacao, com valores de parâmetros estimados de 1,83 mM para Km e Vmax= 0,165*10-3 mmol/min/UI.