CONGELABILIDADE DE EMBRIÕES DE FIV (FERTILIZAÇÃO IN VITRO) ORIUNDOS DE VACAS NELORES SUPLEMENTADAS COM CANOLA EM GRÃO

O aproveitamento maximo de estruturas (embrioes e oocitos) recuperaveis de uma vaca, com a possibilidade de preserva-las atraves da criopreservacao, e a garantia de sucesso em programas de transferencia de embrioes e fertilizacao in vitro. Desta maneira a descoberta e aprofundamento de tecnicas que otimizem ainda mais este aproveitamento se fazem necessarios. Pensando nessas inovacoes, o experimento sera realizado no Centro de Biotecnologia da Reproducao – BIOTEC. Serao utilizadas 12 vacas nelore, proveniente do mesmo grupo genetico distribuidos em dois grupos: Tratamento 1 = controle (silagem+concentrado) e Tratamento 2 = Canola (silagem+concentrado+canola). Apos 45 dias as vacas serao aspiradas (aspiracao folicular), esta primeira aspiracao sera desprezada e em seguida serao realizadas mais quatro aspiracoes em cada animal, com intervalo de quinze dias, para obtencao de oocitos suficientes para fecundacao in vitro. Os oocitos serao quantificados e classificados como: bom, regular e ruim conforme descrito por Leibfried & First (1979). A maturacao sera realizada em TCM199 com sais de Earles, glutamina e NaHCO3, suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 22 µg/mL piruvato, 50 µg/mL de gentamicina, 0,5 µg de FSH/mL, 50 µg de LH/mL e 1 µg de estradiol/mL, mantidos em estufa, a 38,5°C, 5% de CO2 em ar com maxima umidade durante 22-24 horas. Durante esse periodo os CCOs (complexo cumulus-ovocitos) permaneceram em microgotas de 100µl de meio de maturacao coberta por oleo mineral. A fecundacao sera realizado em 100 µL de meio TALP suplementado com 10 µg/mL de heparina, 22 µL/mL de piruvato, 50 µg/mL de gentamicina, albumina serica bovina-BSA (sem acidos graxos), solucao de PHE (2 µM de penicilina, 1 µM de hipotaurina e 0,25 µM de epinefrina). O semen sera de touro da raca Nelore, descongelado em banho-maria a 35 °C. Sera utilizado 2x106 espermatozoides/mL e apos 30 minutos de incubacao dos espermatozoides, os CCOs serao transferidos para as microgotas (20 oocitos/gota), onde permaneceram por 10 a 18 horas, a 38,5 °C, em atmosfera com 5% de CO2 em ar. Apos a realizacao da fertilizacao, os zigotos serao cultivados in vitro no meio SOF suplementado com SFB, com monocamada de celulas da granulosa. O cultivo sera realizado por 18 horas pos-inseminacao, em incubadora, com atmosfera gasosa contendo 20% CO2 em ar, com maxima umidade. Decorrido 48 horas, sera avaliado a taxa de clivagem e realizado a renovacao do meio de cultivo. Serao realizadas duas outras avaliacoes, no estagio de morula (8 celulas), blastocisto inicial. Apos os embrioes serao vitrificados. Em seguida descongelados voltando para incubadora, com atmosfera gasosa contendo 20% CO2 em ar, com maxima umidade, observando com 06, 12 e 24 horas se estes embrioes chegaram a blastocisto, blastocisto expandido e blastocisto eclodido. O delineamento experimental sera totalmente casualizado e os animais serao distribuidos em dois tratamentos de acordo com o modelo estatistico proposto, para a variavel taxa de blastocisto, morulas e eclosao sera utilizado a distribuicao de probabilidade binomial e a funcao de ligacao logistica, estimados por meio da metodologia de modelos lineares generalizados (Nelder e Wedderburn, 1972), utilizando-se o software GLIM 4.0