NGF β/HIF-1α双重转染的骨髓间充质干细胞对神经元轴突再生的作用

目的 观察神经生长因子β （nerve growth factor β,NGF β）/低氧诱导因子-1 α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）双重转染的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）对神经元轴突再生微环境的改善作用,为完善微环境中轴突再生的理论提供资料.方法 分别构建携带编码NGFβ、HIF-1α的慢病毒载体,用最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）转染BMSCs后,Western blot检测转染后的BMSCs表达NGF β、HIF-1α的情况.培养SD大鼠皮质神经元并将其与转染后的BMSCs用Transwell双层培养板构建共培养体系.将共培养体系在厌氧培养罐中培养48 h后,用ELISA方法检测神经元培养上清液中NGF β、HIF-1α、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达水平,并用Image pro-Plus软件测量神经元轴突的长度.实验分组：A组：单独培养神经元;B组：BMSCs与神经元共培养;C组：NGF β转染的BMSCs与神经元共培养;D组：HIF-1 α转染的BMSCs与神经元共培养;E组：NGFβ/HIF-1α双重转染的BMSCs与神经元共培养.结果 Le-RFP-NGFβ和Le-GFP-HIF-1 α基因转染BMSCs转染率分别为84.83％和89.63％.Western blot检测显示,转染后的BMSCs能表达目的蛋白NGFβ和HIF-1α.共培养体系ELISA检测结果显示,C组和E组的NGFβ的表达量明显高于A、B组（P＜0.05）;D组和E组的HIF-1α的表达量明显高于A、B组（P＜0.05）.D、E两组的VEGF表达量高于A、B两组（P＜0.05）.Image pro-Plus测量神经元轴突长度结果显示,C、D、E组大于A、B两组（P＜0.05）,E组大于C、D组（P＜0.05）.结论 与NGF β/HIF-1α双重转染BMSCs共培养的神经元轴突生长情况良好,在共培养环境中对神经元存活发挥重要作用的NGFβ、HIF-1α、VEGF等因子高表达.