Prokaryotic expression and renaturation of engineering chimeric Fab antibody against human hepatoma

目的 分别在大肠杆菌中高效表达嵌合Fd及嵌合轻链,并进行嵌合Fab复性的研究. 方法分别将嵌合Fd及嵌合轻链基因插入到原核表达载体pET32a中,构建成重组载体pET32a/cFd和pET32a/cL.转化大肠杆菌后诱导其表达.大量制备表达的嵌合Fd 及嵌合轻链后,按二者绝对量等摩尔比混合后进行透析复性.然后,分别利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA进行分析和鉴定. 结果成功获得了嵌合Fd及嵌合轻链的原核非融合高效表达,表达蛋白相对分子质量(Mr)均在24×103左右.表达量分别约占菌体总蛋白的28.3%和32.3%,2种目的蛋白均主要以不溶性的包涵体形式存在.另外,嵌合Fd与嵌合轻链在缓慢透析的条件下成功地复性为嵌合Fab抗体,Mr约为42×103,具有特异性抗原结合活性和良好的亲和力.在起始总蛋白浓度为100μg/ml时,复性效率约为49%. 结论成功实现了嵌合Fab抗体的高效表达及高效复性,为进一步探讨其在肝癌治疗中的应用奠定了基础。