Caracterização de um Antígeno Rico em Prolina(PRA/Ag2) do fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis

O fungo dimorfico Paracoccidioides brasiliensis e o agente causador da micose sistemica mais prevalente na America Latina. Em humanos, a infeccao se da pela inalacao de propagulos do fungo, que ao alcancarem o epitelio pulmonar transformam se na fase leveduriforme, parasitaria, do fungo P. brasiliensis. Neste trabalho,descrevemos a caracterizacao de um homologo de PRA/Ag2 (Antigeno rico em prolina), uma proteina predita de parede celular, primeiramente identificada em Coccidioides immitis. A proteina, o cDNA e a sequencia genomica foram analisados. Analises atraves de Southern blot sugerem que ha somente uma copia do gene em P.brasiliensis. O cDNA clonado foi expresso em Escherichia coli e a rPbPRA/Ag2 purificada foi utilizada para obtencao do anticorpo policlonal. A proteina recombinante purificada foi reconhecida pelo soro de pacientes com paracoccidioidomicose comprovada e nao foi reconhecida pelo soro de pacientes saudaveis. Microscopia eletronica e estudos bioquimicos demonstraram a presenca do PbPRA/Ag2 na parede celular de P. brasiliensis, ligada atraves de uma âncora de GPI. A expressao do gene que codifica Pbpra/ag2 foi analisada atraves de PCR em Tempo Real e os resultados demonstraram regulacao da expressao nas fases de P. brasiliensis, com maior nivel de expressao na fase miceliana. Analises da expressao proteica corroboram os resultados da RT-PCR em Tempo Real.