抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段抗体dsFv VL链的构建、表达和鉴定

目的将抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段（NH-LBP）抗体的Fv L链引入半胱氨酸（Cys）,并表达、纯化。方法应用mega-primer PCR方法,在抗NH-LBP单克隆Fab抗体的轻链基因骨架区中引入编码Cys的基因序列,将目的序列放入载体pET-28a（＋）,于工程菌BL21star（DE3）中表达及TALON柱芯亲合纯化,通过ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力。结果dsFv VL链的Thr21替换为Cys,扩增出基因片段长约为650bp,经BL21star（DE3）菌表达出相对分子质量约为28×10^3的目的蛋白,与NH-LBP具有一定的结合力。结论抗体轻链中成功引入了Cys。