人抗HBsAg单链抗体／鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定

目的：构建人抗HBsAg单链抗体（ScFv）／鱼精蛋白截短体（truncated protamine，tP）融合基因，在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv／tP融合蛋白的活性。方法：设计引物扩增人抗HBsAg ScFv HBs15基因，在其3’端引物引入tP的编码基因，PCR扩增获得ScFv／tP融合基因，将其克隆入原核表达载体pET-32a后，在大肠杆菌BL21（DE3）LysS内诱导表达．表达产物经SDS—PAGE及Western blot鉴定后，用Ni—NTA螯合层析介质纯化。间接ELISA分析ScFv／tP融合蛋白的亲和活性，凝胶迁移阻滞实验检测ScFv／tP融合蛋白与DNA结合的情况。结果：成功获得人抗HBsAg ScFv／tP融合基因，经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达，表达的ScFv／tP融合蛋白不仅保持了与HBsAg结合的能力，同时具有DNA结合活性。结论：ScFv与tP融合后，同时具有与抗原和DNA结合的活性，为该ScFv的进一步应用奠定了基础。