Fitoquímica e avaliação do efeito biológico fotoinduzido de extratos e substâncias isoladas de Annonaceae (planta in natura e obtida por cultura de células)

O objetivo do estudo quimico, biologico e biotecnologico de duas especies de Annonaceae (Annona cacans, Annona mucosa, Annona squamosa, ou Guatteria hispida) foi buscar substâncias bioativas e fotoativadas nestas matrizes vegetais (plantas in natura e obtidas por cultura de celulas). O estudo dos extratos brutos metanolicos foi realizado monitorando o espectro de absorcao na regiao de interesse em terapia fotodinâmica (600 a 800 nm), na analise do espectro de fluorescencia (modo emissao e excitacao), na avaliacao da eficiencia fotoquimica e nos resultados dos bioensaios, incluindo a avaliacao do efeito biologico fotoinduzido por radiacao laser a 660 nm em modelo experimental in vitro de terapia fotodinâmica antimicrobiana (PDT-antimicrobiana). Para tanto, procedeu-se a adequacao de metodologia para os ensaios biologicos em PDT-antimicrobiana e o desenvolvimento de procedimentos analiticos, incluindo o estudo fitoquimico biomonitorado, obtendo-se inicialmente o perfil quimico (CCDC, CG, CLAE, RMN ou ESI-MS). Os resultados possibilitaram a identificacao de 11 alcaloides ja descritos em literatura para especies de Annonaceae diretamente nos extratos brutos (desreplicacao). Apos a etapa de triagem e por comparacao entre os resultados obtidos foi possivel definir a G. hispida e A. squamosa como as especies mais promissoras para as quais continuou-se o estudo. As demais especies apresentaram baixa absorcao e fluorescencia na regiao de interesse em PDT e baixa eficiencia fotoquimica. Os extratos das duas especies escolhedas com substâncias que nao puderam ser identificadas na etapa de desreplicacao foram submetidos ao fracionamento biomonitorado e para as substâncias isoladas e purificadas realizou-se a sua determinacao estrutural utilizando-se metodos espectroscopicos de analise o que possibilitou a identificacao de 5 alcaloides: os alcaloide Isomoschatolina e 9-metoxi-isomoschatolina foram isolados apenas das amostras de G. hispida e o alcaloide Palmatina isolado apenas do extrato de A. squamosa, enquanto os alcaloides Anonaina e Liriodenina foram isolados dos extratos das duas especies. No estudo biotecnologico procedeu-se o estabelecimento e desenvolvimento de culturas de celulas das duas especies vegetais mais promissoras nos bioensaios, visando, alem do estudo fitoquimico, a manipulacao de fatores fisicos e quimicos para a producao de metabolitos secundarios e o estudo comparativo dos metabolitos bioativos nas culturas de celulas e aqueles obtidos de partes da planta in natura. Foram obtidos calos friaveis e livres de oxidacao para as duas especies. O estudo comparativo dos espectros de ESI-MS/MS dos extratos bioativos mostrou similaridades entre a composicao dos extratos da planta in natura com o obtido por cultura de celulas e possibilitou a quantificacao por UHPLC-MS de alguns alcaloides ja descritos para especies de Annonaceae nas amostras estudadas, incluindo os alcaloides asimilobina, Liriodenina, lisicamina e Palmatina que apresentam potencial para aplicacao em PDT antimicrobiana observando-se similaridades nos resultados em termos quimicos e biologicos. Em colaboracao com o "Laboratoire Jean Perrin, Campus Jussieu, Universite Pierre et Marie Curie, em Paris, Franca", foram realizados alguns estudos dos alcaloides isoquinolinicos, tais como, Isomoschatolina (Gh1) e Palmatina (As3) sozinhos e associados a ciclodextrina. Os estudos sugerem que esses alcaloides quando complexados sao melhor direcionados no interior das celulas tumorais e se concentram predominantemente nos lisossomos. Abstract