Caracterización molecular e inmunológica del antígeno recombinante rhcp26/23 de haemonchus contortus. Ensayos vacunales

Las gastroenteritis parasitarias por helmintos constituyen una de las enfermedades parasitarias mas frecuentes del ganado ovino a nivel mundial. Dentro de estos procesos se encuentra la hemoncosis ovina, enfermedad causada por el nematodo gastrico H.contortus, responsable de numerosas perdidas economicas. El control de este proceso ha radicado, casi exclusivamente, en el uso de farmacos antihelminticos; sin embargo su uso indiscriminado, y en ocasiones no relacionado con los procesos, ha ocasionado la aparicion de resistencias frente a los principales principios activos. Ante esta situacion la alternativa es la inmunoprofilaxis. Son numerosos los antigenos que han mostrado eficacia frente a H.contortus, si bien la dificultad en la obtencion de cantidades suficientes de estos hace que sea necesario recurrir a nuevas tecnologias -ADN recombinante- para obtener antigeno en cantidades abundantes que permitan disponer de una vacuna comercial, sin embargo, hasta el momento ninguno de los antigenos recombinantes probados han mostrado la misma eficiencia que su homologo natural. La fraccion antigenica p26/23 es una de las que han mostrado su poder inmunoprotector frente a H.contortus, y dado que su homologo recombinante no habia sido probado nos propusimos el aislamiento, purificacion y caracterizacion de la proteina p26/23, su secuenciacion, clonacion y expresion en E.coli (rHcp26/23), tanto en condiciones nativas como desnaturalizantes, valorando su poder inmunoprotector en un ensayo vacunal con corderos de 3 meses de edad. A partir de membranas de nylon electrotransferidas con ESA se escindieron los peptidos de 24 kDa (p26/23), tras su identificacion con sueros de ovejas vacunadas en experimentos anteriores. El producto asi obtenido fue sometido a cromatografia de fase reversa (RP-HPLC), eliminando posibles contaminaciones con peptidos comigrantes, obteniendo un unico peptido purificado de ca. 24kDa (p26/23). El peptido obteni