Analyses structurales et fonctionnelles comparées de la protéine non structurale NS2 des hepacivirus : topologie transmembranaire, activité protéolytique et rôle dans la morphogenèse des particules virales

Environ 150 millions de personnes sont infectees par le virus de l'hepatite C (VHC) et presentent un risque de developper a terme un carcinome hepatocellulaire. Ce travail a eu pour objectif d'etudier le role de la proteine non structurale 2 (NS2) du VHC et, plus particulierement, de determiner si les caracteristiques structurales et fonctionnelles de NS2 du VHC sont conservees pour deux virus phylogenetiquement proches, le virus GB-B (GBV-B) et l'hepacivirus non primate (NPHV) qui infectent respectivement des petits primates et des chevaux. Nos etudes structurales ont revele que, malgre une identite de sequence limitee, les proteines NS2 du VHC et du GBV-B possedaient des organisations topologiques similaires, avec trois segments transmembranaires dans leur region N-terminale et un domaine cytosolique C-terminal. Nous avons demontre que NS2 du GBV-B et du NPHV etaient des proteases a cysteine permettant le clivage de la jonction NS2/NS3 et que NS2 du GBV-B etait une protease dimerique possedant une triade catalytique composite, comme NS2 du VHC. Cependant, contrairement au VHC et au NPHV, la region transmembranaire de NS2 du GBV-B est indispensable a son activite proteolytique. Nous avons montre que le role de NS2 dans l'assemblage des particules virales est virus- et genotype-specifique. De plus, des interactions specifiques entre les domaines N- et C-terminaux de NS2 du VHC semblent critiques pour la morphogenese des virions. Nous avons egalement entrepris de developper une methodologie d'imagerie permettant le suivi dynamique de NS2 du VHC dans des cellules vivantes infectees afin de mieux comprendre les mecanismes d'action de cette proteine dans le cycle des hepacivirus.