Gene cloning, expression and purification of tetanus toxin fragment C and characterization of its immunogenicity

目的 对破伤风毒素C片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析. 方法应用PCR技术直接从破伤风梭状芽孢杆菌的质粒DNA中扩增出1370bp的破伤风毒素C片段(简称TTC)基因,将此基因片段插入到表达载体pET-22b(+)中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用阴离子交换层析和金属离子螯合亲和层析方法进行蛋白纯化后,参照 的免疫攻击实验方法测定其效价. 结果经SDS-PAGE分析,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的15%.免疫印迹实验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原.纯化得到纯度为96.5%的重组蛋白,纯化回收率达40%.免疫攻击实验测定其效价为18.706IU/mg,ED50为20μg.经加强免疫,1μg免疫剂量即能产生足够的抗体保护动物免受破伤风毒素的攻击. 结论所获得的重组蛋白具有良好的免疫原性,为开发基因工程疫苗奠定了基础。