Desenvolvimento e avaliação imunológica de Nanotubos de Carbono funcionalizados com a proteína de envelope de Dengue virus 3

A dengue e considerada a doenca infecciosa de maior impacto epidemiologico no Brasil e, cada vez mais, aumenta-se a necessidade de investimento em pesquisas envolvendo esse virus. Um dos s do desenvolvimento de uma vacina contra o Dengue virus (DENV) e a necessidade da imunizacao ser eficaz para os 4 sorotipos, mas apesar dos esforcos de muitos grupos de pesquisa, nenhuma delas esta disponivel atualmente. No nosso estudo, utilizamos a tecnologia dos Nanotubos de Carbono (NTC) para construcao de uma ferramenta testada como imunogeno experimental contra o DENV. NTCs possuem diversas aplicacoes devido as suas propriedades unicas, como biocompatibilidade, alta relacao superficie/volume e capacidade de internalizacao em celulas. Na area biologica, pode-se citar o transporte e disponibilizacao de drogas, proteinas e genes em celulas, e tambem a apresentacao de biomoleculas em sistemas biologicos. Estudos anteriores mostraram que a ligacao de NTCs com antigenos tem potencial imunogenico. Sabe-se que a proteina do envelope (E) do DENV e imunodominante, sendo gerada uma resposta imune protetora e vitalicia para o mesmo sorotipo do virus. O gene da proteina E de Dengue virus 3 (DENV3E) foi inserido no vetor plasmidial pQE9 para expressao em Escherichia coli, linhagem M-15. Em seguida, a proteina produzida foi purificada e utilizada para ligacao covalente em NTCs de paredes multiplas (MWNT). Esse processo e chamado de funcionalizacao e consiste na reacao de amidacao ativada por diimida entre os radicais aminicos da proteina e as porcoes carboxiadas dos MWNT, gerando a ferramenta MWNT-DENV3E. A eficiencia da funcionalizacao foi verificada por SDS-PAGE e Espectroscopia Raman. Avaliacoes preliminares apos a imunizacao de camundongos BALB/C mostraram a producao de altos titulos de anticorpos e aumento na proliferacao dos linfocitos antigeno-especificos in vitro. Camundongos imunizados com MWNT-DENV3E foram infectados com uma amostra adaptada de DENV-3, apresentando sinais clinicos da doenca, como aumento na carga viral, na atividade de MPO e nas transaminases hepaticas, altos niveis de TNF- no baco e trombocitopenia. Esses resultados sugerem um quadro de exacerbacao da resposta desencadeada pela imunizacao, uma vez que animais imunizados separadamente com DENV3E e MWNT mostraram indicios de protecao ao , sendo capazes de controlar a multiplicacao viral. Mais estudos deverao ser realizados para elucidar os mecanismos envolvidos, para melhor se compreender as interacoes entre a imunopatogenese das infeccoes por DENV e o impacto do uso dos NTCs nos sistemas biologicos, e assim melhor se avaliar o potencial do imunogeno desenvolvido.